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HPLC/DAD/ESI-MS를 이용한 혈장시료 중 갑상선 호르몬 분석
Determination of thyroid hormones in plasma samples by high performance liquid chromatograph/diode array detector/electrospray ionization mass spectrometer
분석과학 / Analytical Science and Technology, (P)1225-0163; (E)2288-8985
2007, v.20 no.5, pp.424-433
(KIST 생체대사연구센터)
(중외제약 중앙연구소)
(연세대학교)
(중외제약 중앙연구소)
(연세대학교)
표희수,
곽선영,
&
문명희.
(2007). HPLC/DAD/ESI-MS를 이용한 혈장시료 중 갑상선 호르몬 분석. 분석과학, 20(5), 424-433.
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초록
혈장시료 중의 갑상선 호르몬을 고체상 추출법을 이용하여 추출한 후 HPLC/DAD/ESI-MS (high-performance liquid chromatograph/diode array detector/electrospray ionization-mass spectrometer)를 사용하여 분석하였다. 7종의 thyroid hormones의 HPLC 분리조건은 Hypersil ODS 컬럼(4.6 mm I.D., 250 mm length, particle size <TEX>$5{\mu}m$</TEX>)을 사용하고 ammonium formate buffer와 아세토나이트릴을 이동상으로 하여 기울기 용리한 결과 완전 분리가 가능하였으며, UV spectra 및 질량스펙트럼을 확인할 수 있었다. 고체상추출법에 의한 전처리 최적 조건을 조사한 결과 시료를 pH 3으로 한 후 C18 고체상을 사용하여 4 mL의 메탄올로 용리할 경우 회수율이 74.5-115.7%로 나타났다. HPLC/ESI-MS를 이용하여 20-500 ng/mL범위에서 검량선을 작성한 결과 <TEX>$r^2$</TEX>값은 0.9939-0.9978으로 나타났으며 검출한계는 20-50 ng/mL (38.1-162.8 pmol/mL)로 계산되었다. 정상인의 혈장에서 thyroxine의 정량이 가능하였으며 그 결과 50.98-112.97 ng/mL로 검출되었다.
- keywords
- thyroid hormones, HPLC/DAD/ESI-MS, SPE, plasma.... ., thyroid hormones, HPLC/DAD/ESI-MS, SPE, plasma.... .
Abstract
An analytical method for the determination of thyroid hormones in plasma samples has been studied by solid-phase extraction and high-performance liquid chromatography/diode array detector (DAD)/electrospray ionization (ESI)-mass spectrometer. Seven thyroid hormones were successfully separated by gradient elution on the reverse phase Hypersil ODS column (4.6 mm I.D., 250 mm length, particle size <TEX>$5{\mu}m$</TEX>) with ammonium formate buffer and acetonitrile. In addition, these compounds were confirmed by UV spectra and ESI-mass Spectra. The extraction recoveries of thyroid hormones in the plasma sample (at pH 3) were in the range of 74.5-115.7 % with solid-phase extraction by C18, followed by elution with 4 mL of methanol. The calibration curves showed good linearity with the correlation coefficients (<TEX>$r^2$</TEX>) varying from 0.9939 to 0.9978 and the detection limits of all analytes were obtained in the range of 20-50 ng/mL (38.1-162.8 pmol/mL). As a result, thyroxine was found in the range of 50.98-112.97 ng/mL in normal plasma samples.
- keywords
- thyroid hormones, HPLC/DAD/ESI-MS, SPE, plasma
참고문헌
1
O, (1974) “Handbook of physiology,
2
안세영, (2004) 갑상선 클리닉, 성보사
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