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바지락 (Ruditapes philippinarum) 혈구의 일산화질소 (nitric oxide) 정량

Quantification of nitric oxide concentration in the hemocytes of Manila clam Ruditapes philippinarum by using 4,5-diaminofluorescein diacetate (DAF-2) detection method

초록

일산화질소 (NO) 는 면역계에서 세포내 외의 신호전달에 관여하는 물질로 생물의 생리적, 병리학적 기작을 조절한다. 본 연구는 바지락 혈구의 NO 농도 측정을 위해 4,5-diaminofluorescein diacetate (DAF-2 DA) 를 이용한 DAF assay의 적용이 가능한지 확인하고자 화상분석법, 형광흡광도 측정법 및 유세포분석 기법 등을 이용하였다. 연구결과 인위적인 바지락 혈구의 NO 생성을 위해 L-arginine을 첨가한 경우 대조구에 비하여 NO 생성이 유의적으로 증가하였고, 반대로 NO 저해제인 L-NAME를 첨가한 경우 NO 생성은 급격히 감소하였다. 이러한 결과는 본 조사에 이용된 화상분석법, 형광흡광도 측정법 및 유세포분석 기법 등 모든 조사 방법에서 동일하게 확인되었다. 특히 3가지 측정 방법 중 유세포 분석법은 측정의 신속성, 신뢰성 및 정확성을 담보할 수 있는 유용한 방법으로 판단된다. 따라서 유세포 분석기를 이용한 NO 측정은 향후 바지락의 생리적 병리적 특성을 확인하는데 유용한 마커로써 이용될 수 있을 것으로 기대된다.

keywords
nitric oxide, hemocyte, diaminofluorescein-2-diacetate, flow cytometer, Ruditapes philippinarum

Abstract

일산화질소 (NO) 는 면역계에서 세포내·외의 신호전달에관여하는 물질로 생물의 생리적, 병리학적 기작을 조절한다. 본 연구는 바지락 혈구의 NO 농도 측정을 위해4,5-diaminofluorescein diacetate (DAF-2 DA) 를 이용한DAF assay의 적용이 가능한지 확인하고자 화상분석법, 형광흡광도 측정법 및 유세포분석 기법 등을 이용하였다. 연구결과인위적인 바지락 혈구의 NO 생성을 위해 L-arginine을 첨가한 경우 대조구에 비하여 NO 생성이 유의적으로 증가하였고,반대로 NO 저해제인 L-NAME를 첨가한 경우 NO 생성은급격히 감소하였다. 이러한 결과는 본 조사에 이용된 화상분석법, 형광흡광도 측정법 및 유세포분석 기법 등 모든 조사 방법에서 동일하게 확인되었다. 특히 3가지 측정 방법 중 유세포분석법은 측정의 신속성, 신뢰성 및 정확성을 담보할 수 있는유용한 방법으로 판단된다. 따라서 유세포 분석기를 이용한NO 측정은 향후 바지락의 생리적·병리적 특성을 확인하는데유용한 마커로써 이용될 수 있을 것으로 기대된다.

keywords
nitric oxide, hemocyte, diaminofluorescein-2-diacetate, flow cytometer, Ruditapes philippinarum

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