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  • P-ISSN1225-0163
  • E-ISSN2288-8985
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17권 1호
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SSCP와 DHPLC에 의한 β2-교감신경수용체 유전자의 돌연변이 분석

Mutation Analysis in β2-Adrenergic Gene by Single Strand Conformation Polymorphism (SSCP) and Denaturing High Performance Liquid Chromatography (DHPLC)

분석과학 / Analytical Science and Technology, (P)1225-0163; (E)2288-8985
2004, v.17 no.1, pp.53-59
장원철 (단국대학교)
한상만 (단국대학교)
남윤형 (단국대학교)
박상범 (단국대학교)
장원철, 한상만, 남윤형, & 박상범. (2004). SSCP와 DHPLC에 의한 β2-교감신경수용체 유전자의 돌연변이 분석. 분석과학, 17(1), 53-59.
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초록

현재 일반적으로 많이 사용되는 single strand conformation polymorphism (SSCP)나 denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE)같은 돌연변이 검출법은 많은 시간과 비용, 그리고 노동력이 소모된다는 단점과 실험자의 실험에 대한 숙련도에 의해 실험 결과가 달라지는 한계점을 가지고 있다. 이런 단점들을 보완하기 위하여 ion-pair reversed phase chromatography (IP-RPC)방식을 이용한 denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC)방법을 사용하여 기관지 천식 (bronchial asthma)을 조절하는 베타2-교감신경수용체 유전자의 돌연변이를 검출하였다. 80명의 천식 환자의 혈액에서 genomic DNA를 추출하여 중합효소연쇄반응 (polymerase chain reaction)을 이용해 증폭하고, 그 산물을 SSCP와 DHPLC로 분석하였다. 그 결과, 베타2-교감신경수용체 유전자에서 SSCP는 80명의 sample 가운데 19개 (23.75%)의 돌연변이를 검출하였고, DHPLC는 25개 (31.25%)의 변이를 검출하였다. 돌연변이 검출법으로 DHPLC 분석법이 SSCP보다 더 빠르고 효과적인 방법임을 확인하였다.

keywords
DHPLC, SSCP, PCR, 2-adrenergic receptor gene

Abstract

Up to now, methods for the detection of genetic alterations as single strand conformation polymorphism (SSCP) or denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) have been used. It is too labor-intensive and expensive to serve for routine analysis. Moreover, lower in its sensitivity and specificity being also strongly dependent on the experience of the investigater. To improve these problems, we analysed mutation of 2-adrenergic receptor gene that controls bronchial asthma by denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC) according to ion-pair reversed phase chromatography (IP-RPC). We extracted genomic DNA from 80 asthma patients and then amplified DNA using PCR and analysed PCR product by SSCP and DHPLC. As a result, we analysed mutation frequency is 19 (23.75%) on SSCP and 25 (31.25%) on DHPLC in β2-adrenergic receptor gene. We conclude that DHPLC is a fast and simple screening method rather than SSCP analysis.

keywords
DHPLC, SSCP, PCR, <TEX>${\beta}_2$</TEX>-adrenergic receptor gene


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