- P-ISSN 1225-0163
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고체상 추출과 친화 크로마토 그라피-유도결합 플라즈마질량분석법을 이용한 한국인 혈청에서의 셀레노 단백질 정량
Quantification of seleno proteins in Korean blood serum using solid phase extraction and affinity chromatography-inductively coupled plasma/mass spectrometry
분석과학 / Analytical Science and Technology, (P)1225-0163; (E)2288-8985
2014, v.27 no.2, pp.92-99
https://doi.org/10.5806/AST.2014.27.2.92
(한국교원대학교)
(충북대학교)
(한국교원대학교)
(충북대학교)
(한국교원대학교)
안지윤,
권효식,
&
박용남.
(2014). 고체상 추출과 친화 크로마토 그라피-유도결합 플라즈마질량분석법을 이용한 한국인 혈청에서의 셀레노 단백질 정량. 분석과학, 27(2), 92-99, https://doi.org/10.5806/AST.2014.27.2.92
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초록
본 연구에서는 음이온 고체상 추출법 (AE SPE; anion exchange solid phase extraction)을 사용하여 간섭요인을 제거한 후, 친화 크로마토그래피 AF HPLC; affinity high performance liquid chromatography)와 유도결합 플라스마 질량분석법 (ICP/MS; inductively coupled plasma/mass spectrometry)을 사용하여 한국인의 혈청에서의 셀레노 단백질을 분리하고 정량하였다. 먼저 동위원소 희석법으로 셀레늄 총량을 분석한 결과, 건강한 한국 사람의 혈청내 평균농도는 94.3 ± 2.3 ng g−1 이었다. AE SPE와 AF 컬럼을 online으로연결하여 셀레노단백질인 glutathione peroxidase (GPx), selenoprotein P (SelP), selenoalbumin(SeAlb)을 분리하고, 후 컬럼 동위원소 희석법 (PC ID; post column isotope dilution)으로 정량하였다. 혈청 인증표준물인 BCR-637을 분석한 결과 전체 셀레노 단백질의 합은 85.4 ± 3.4 ng g−1으로 문헌값인 81±7ng g−1과 일치하는 결과를 얻을 수 있었다. 20 명의 건강한 한국인의 혈청에서 얻은 셀레노 단백질 GPx,SelP 및 SeAlb 의 농도는 각 각 12.1 ± 1.4 ng g−1, 57.2 ± 2.0 ng g−1, 그리고 20.0 ± 1.9 ng g−1 이었으며 이들의 합인 89.3 ng g−1은 셀레늄의 총량값인 94.3 ng g−1과 거의 같은 값으로 혈청에서의 셀레늄은 주로셀레노 단백질로 구성되어 있음을 알았다. 이 중 GPx의 농도는 간섭을 제거하기 전인 25.0 ng g−1에 비해 50% 이상 크게 감소하였는데 이로서 간섭은 주로 GPx에 포함되어 있음을 확인할 수 있었다. AE SPE는 간섭요인인 Cl과 Br을 제거 하는데 매우 효과적임을 보여주었다.
- keywords
- Korean blood serum, AF HPLC-ICP/MS, selenoproteins, GPx, SelP, SeAlb, solid phase extraction
Abstract
Interferences were removed using anion exchange solid phase extraction (AE SPE) in quantificationof selenoproteins in Korean human blood serum with affinity high performance liquid chromatography (AFHPLC)-inductively coupled plasma/mass spectrometry (ICP/MS). The average selenium level obtained for healthyKoreans was 94.3 ± 2.3 ng g−1 using isotope dilution method. AE SPE was coupled to AF column to separate3 selenoproteins, glutathione peroxidase GPx, selenoprotein SelP, and selenoalbumin SeAlb. Post column isotopedilution was employed to quantify the proteins. The certified reference material of human blood serum BCR-637 was analyzed to give total selenoprotein concentration of 85.4 ± 3.4 ng g−1, which agreed well with thereference value of 81 ± 7 ng g−1. The pooled concentration of GPx, SelP, and SeAlb from healthy Koreans(n=20) was 12.1 ± 1.4 ng g−1, 57.2 ± 2.0 ng g−1, and 20.0 ± 1.9 ng g−1, respectively. The sum of selenoproteinsis 89.3 ng g−1, which is about the same as the total selenium concentration of 94.3 ng g−1. The fact suggeststhat selenium in blood serum is mostly consisted of selenoproteins. After the removal of interference, GPxshowed a significant decrease (more than 50%) from 25.0 ng g−1 to 12.1 ng g−1. It was identified that theinterference in blood serum was mostly from GPx and the use of AE SPE was proven to be efficient ineliminating Cl and Br that cause interference to GPx.
- keywords
- Korean blood serum, AF HPLC-ICP/MS, selenoproteins, GPx, SelP, SeAlb, solid phase extraction
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