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  • P-ISSN1225-0163
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23권 6호
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서로 다른 두 작용기를 이용한 결합법에 의한 접합체 : 도파민 면역분석법

Bioconjugation by dual heterobifunctional coupling method:Use of the conjugates for the detection of dopamine

분석과학 / Analytical Science and Technology, (P)1225-0163; (E)2288-8985
2010, v.23 no.6, pp.537-543
https://doi.org/10.5806/AST.2010.23.6.537
류지은 (서울여자대학교)
이인숙 (서울여자대학교)
류지은, & 이인숙. (2010). 서로 다른 두 작용기를 이용한 결합법에 의한 접합체 : 도파민 면역분석법. 분석과학, 23(6), 537-543, https://doi.org/10.5806/AST.2010.23.6.537
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초록

도파민은 카테콜아민류의 중요한 신경전달물질로서 부족하면 파킨스병과 정신분열증 등을 야기할 수 있다. 그러므로 조작이 비교적 간단하면서 감도가 우수한 분석법의 개발이 필요하다. 이에, 도파민에 대한 경쟁적인 효소면역분석법이 연구되었다. 경쟁적인 면역분석법의 분석감도는 일반적으로 두가지요소에 의해 조절된다. 하나는 경쟁자의 특성과 농도이며, 다른 하나는 결합체, 즉 항체의 그것이다. 따라서, 경쟁자인 BSA-DA과 결합체인 항체-avidin 접합체의 최적화가 수행되었다. 두 접합체는 SATA와SMCC를 이용한 dual heterobifunctional coupling법에 의해 합성되었으며, 최적화 과정을 통해 BSA-DA 접합체의 농도는 6.66 μg/mL, 항체-avidin 접합체의 농도 4.17×10−10 M로 결정되었다. 도파민에 대한 doseresponse curve와 calibration curve의 결과로써 도파민에 대한 검출 한계는 2.3×10−2 μg/mL 이고 검출 영역은 1.0×10−3 M~1.0×10−7 M 이다. 직선성을 갖는 검출영역에서의 검정선을 얻은 결과 [Absorbance =-0.1098 log[DA]+0.0353 (R2 = 0.9956)] 우수한 직선관계를 얻었다.

keywords
immunoassay, dopamine, heterobifunctional coupling, avidin/biotin

Abstract

Dopamine (DA) is an important neurotransmitter molecule of catecholamines. Its deficiency could lead to brain disorder such as Parkinson's disease and schizophrenia. Therefore, it is necessary to establish a suitable analytical technique with sensitivity and simplicity. A competitive enzyme-linked immunosorbent assay for DA has been optimized and characterized. Assay sensitivity is controlled by two factors in competitive immunoassay. One is a nature and concentration of competitor, and the other is those of binder, antibody. Thus,optimization was performed: BSA-DA conjugate and antibody-avidin conjugate were prepared by dual heterobifunctional coupling method using SATA and SMCC. Assay condition was optimized with 6.66 μgmL−1 of BSA-DA and 4.17×10−10 M of antibody-avidin conjugate. A dose-response curve was constructed, and a limit of detection and a dynamic range for DA were accomplished to 2.3×10−2 μg mL−1 and four orders of magnitude (1.0×10−7 M to 1.0×10−3 M), respectively. Calibration curve was constructed on dynamic range and least-squares regression of this data gave the following relationship: absorbance = -0.1098 log[DA]+0.0353 (R2 = 0.9956).

keywords
immunoassay, dopamine, heterobifunctional coupling, avidin/biotin


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