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  • 2024년 07월 03일(수) 13:30
 

  • P-ISSN1225-0163
  • E-ISSN2288-8985
  • SCOPUS, ESCI, KCI

논문 상세

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  • P-ISSN 1225-0163
  • E-ISSN 2288-8985

이온쌍 HPLC/FLD를 이용한 생체 시료중의 Glutathione 농도 분석

Determination of Glutathione in Biological Samples by Ion-pairing HPLC/FLD

분석과학 / Analytical Science and Technology, (P)1225-0163; (E)2288-8985
1999, v.12 no.1, pp.28-33
유정연
이경옥
신호상
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초록

생체 시료내의 glutathione(GSH)을 monobromobimane(MBB)이나 4-fluoro-7-sulfobenzofurazan(SBD-F)으로 최적 유도체화 조건을 확립하였고 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)/형광 검출기(FLD)를 사용하여 정량분석 하였다. MBB로 유도체화한 경우에는 검출한계가 <TEX>$0.03{\mu}g/mL$</TEX>으로서 SBD-F를 사용한 경우보다 감도가 약 200배 정도 향상되었다. 이때 내부표준물질로서 N-acetylcysteine을 사용하였으며, MBB 유도체의 분리능을 개선시키기 위해 tetrabutylammonium 이온을 counter 이온으로 선택하였다. 위의 조건의 이온쌍 크로마토그래피를 이용하여 분석한 결과 <TEX>$0.08{\sim}8.33{\mu}g/mL$</TEX> 농도 범위에서 상관계수가 0.998 이상으로 좋은 직선성을 보여주고 있다. 재현성을 조사한 결과 세 가지 다른 농도에서 상대 표준 편차가 5% 이내로 나타났다. 이 방법은 혈장, 조직 등의 생체 시료중 GSH의 분석법으로 적합하다는 것을 확인하였다.

keywords
glutathione, HPLC/FLD, monobromobimane, plasma, rat liver tissue

Abstract

Glutathione(GSH) in biological samples was determined by high performance liquid chromatographic(HPLC) method with fluorescence detector(FLD) after monobromobimane(MBB) or 4-fluoro-7-sulfobenzofurazan(SBD-F) derivatization. The detection limit of <TEX>$0.03{\mu}g/mL$</TEX> was obtained after MBB derivatization, derivative of MBB was about 200 times more sensitive than that of SBD-F. N-acetylcysteine was used as internal standard and tetrabutylammonium ion as counter ion for better separation. The determination by ion-pairing chromatography after MBB derivatization was characterized by linearity in the range between <TEX>$0.08{\sim}8.33{\mu}g/mL$</TEX> with a good correlation coefficient of 0.998. By precision test appeared relative standard deviation at less than 5% at three different concentrations. This method can be used for the analysis of GSH in plasma and tissue.

keywords
glutathione, HPLC/FLD, monobromobimane, plasma, rat liver tissue


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