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이원효소 연쇄반응의 형광분석에 의한 Urinary Dipeptidase의 활성도 측정
Two-enzyme coupled fluorometric assay of urinary dipeptidase
분석과학 / Analytical Science and Technology, (P)1225-0163; (E)2288-8985
1995, v.8 no.3, pp.359-364
박행순,
&
위정순.
(1995). 이원효소 연쇄반응의 형광분석에 의한 Urinary Dipeptidase의 활성도 측정. 분석과학, 8(3), 359-364.
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초록
Urinary dipeptidase와 alanine dehydrogenase의 연쇄반응을 이용한 형광분석법을 개발하였다. 반응계는 기질로서 L-ala-ala, <TEX>${\beta}-NAD^+$</TEX>, L-alanine dehydrogenase와 pH 9의 12.5mM sodium carbonate buffer를 포함하며 urinary dipeptidase를 가함으로써 반응을 시작했다. 생성된 NADH는 여기파장 340nm, 형광파장 460nm에서 측정했다. 기존의 glycyldehydrophenylalanine(Gdp)의 가수분해 방법과 형광분석법을 비교한 결과 0.996의 높은 상관계수를 나타냈으며 10배 이상의 감도 증가를 보였다.
- keywords
- urinary dipeptidase(Udpase), fluorometric assay, L-alanine dehydrogenase, glycyldehydrophenylalanine (Gdp)
Abstract
Urinary dipeptidase(Udpase) was assayed by fluorometric analysis of NADH which was produced from an indicator enzyme, L-alanine dehydrogenase. The reaction mixture was consisted of a dipeptide(L-ala-L-ala), <TEX>${\beta}-NAD^+$</TEX>, L-alanine dehydrogenase in 12.5 mM sodium carbonate buffer, pH 9.0, and urinary dipeptidase which initiated the reaction. The fluorescence intensity of NADH was measured as a function of time with the excitation wavelength at 340nm and emission at 460nm. Comparison of this fluorometric method with the conventional spectrophotometric method utilizing glycyldehydrophenylalanine(Gdp) as substrate provided the correlation coefficient of 0.996 and increased the sensitivity more than ten times.
- keywords
- urinary dipeptidase(Udpase), fluorometric assay, L-alanine dehydrogenase, glycyldehydrophenylalanine (Gdp)
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